CAS：4091-99-0，2',7'-二氯荧光素二乙酸酯 ，2' 7'-DICHLOROFLUORESCIN DIACETATE

基本信息

常用名 2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯

英文名 H2DCFDA

CAS号 4091-99-0

外观        白色粉末

2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯生物活性

描述 H2DCFDA是可渗透细胞，用于检测细胞内活性氧 (ROS) 的探针。

体外研究 通过流式细胞术分析H2DCFDA探针氧化表明，difESCs中ROS的基础水平比胚胎干细胞（ESC）大约6-7倍。 H2DCFDA和DCFDA探针都以其初始形式是非荧光的，但它们在细胞内经历多步转化，导致荧光产物二氯荧光素（DCF）的形成。这两种探针之间的唯一区别是H2DCFDA的转化涉及氧化。因此，与DCFDA探针相关的荧光相反，H2DCFDA处理的细胞的荧光取决于细胞内ROS水平。令人惊讶的是，流式细胞术分析显示，ESC和负载H2DCFDA的difESC的荧光水平之间的差异接近来自DCFDA处理的细胞的信号之间的差异。后者表明ESCs中氧化H2DCFDA荧光信号低的ROS依赖性原因[1]。

激酶实验 将H2DCFDA溶解在DMSO中以获得10mM储备溶液，并在使用前进一步稀释[1]。 ROS测量[1]为了检测细胞内ROS水平，使用ROS敏感性探针H2DCFDA。将贴壁细胞（ESC，difESC，eMSC，HeLa，U118）与PBS中的5μM染色溶液在37℃下在黑暗中孵育30分钟，然后用0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液收获，悬浮在新鲜培养基中，并且用流式细胞仪立即分析。将对照和PHA活化的淋巴细胞重悬浮于PBS中，与5μMH2DCFDA在黑暗中于37℃温育30分钟，并立即分析。如果需要，与H2DCFDA探针一起使用荧光素染料DCFDA的ROS不敏感修饰。染色程序与H2DCFDA [1]相同。

参考文献

[1]. Lyublinskaya OG, et al. Redox environment in stem and differentiated cells: A quantitative approach. Redox Biol. 2017 Aug;12:758-769.

 2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯物理化学性质

密度 1.5±0.1 g/cm3

沸点 593.5±50.0 °C at 760 mmHg

熔点 209-210ºC(lit.)

分子式 C24H16Cl2O7

分子量 487.286

闪点 312.7±30.1 °C

精确质量 486.027313

PSA 99.13000

LogP 4.62

蒸汽压 0.0±1.8 mmHg at 25°C

折射率 1.635

储存条件

-20℃ 避光，通风干燥处，密封保存

稳定性

常温常压下稳定

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